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大唐开元年间，长安城内接连发生数起离奇命案。先是城东绸缎庄的王掌柜，在自家酒楼宴请宾客时，突然口吐白沫，倒地身亡；紧接着，城南的李秀才与友人相聚饮酒，也出现同样症状，七窍流血而亡。一时间，长安城人心惶惶，百姓们谈酒色变，谣言西起，都说是有妖邪作祟。
武则天听闻此事后，忧心忡忡，急召狄仁杰入宫，命他彻查此案，还长安百姓一个安宁。狄仁杰领命后，立刻带着马荣、乔泰等亲随展开调查。
他们首先来到王掌柜的酒楼。酒楼内一片狼藉，宾客们早己散去。狄仁杰仔细询问了当晚在场的人，得知王掌柜所饮之酒是酒楼自酿的陈年佳酿，平日里也常有人饮用，从未出过问题。狄仁杰命人取来酒坛，发现酒的颜色和气味都无异常。他又让仵作对王掌柜的尸体进行检验，仵作报告说，王掌柜是中毒而亡，但毒物成分不明。
接着，狄仁杰又来到李秀才家中。李秀才的家人悲痛欲绝，狄仁杰安慰了他们一番后，开始询问案发经过。李秀才的朋友说，他们所饮之酒是从城西的一家酒肆买来的。狄仁杰立刻前往那家酒肆。
酒肆老板见到狄仁杰，吓得脸色苍白，连忙跪地喊冤：“大人，小人开店多年，一首本本分分，从未做过伤天害理之事啊。这酒也是从正规的酒坊进的货，不知为何会害人性命。”狄仁杰仔细查看了酒肆的账本和进货记录，又取了一些酒样，准备带回去检验。
回到府衙后，狄仁杰将两处取来的酒样进行对比分析，发现酒中似乎都含有一种微量的有毒物质，但这种物质极难检测出来。狄仁杰意识到，这背后一定有一个精通毒术的高手在作祟。
为了找出凶手，狄仁杰决定在长安城内张贴告示，悬赏提供线索者。同时，他派人在各大酒肆、酒坊暗中监视。
几日后，一个神秘人来到狄仁杰府上，声称知道一些关于毒酒案的线索。狄仁杰立刻接见了他。神秘人说，他曾在城外的一座破庙里见过一个形迹可疑的人，那人手中拿着一些奇怪的草药和瓶子，似乎在配制毒药。
狄仁杰根据神秘人提供的线索，带领衙役前往那座破庙。破庙里弥漫着一股刺鼻的气味，地上散落着一些草药和瓶瓶罐罐。狄仁杰仔细查看，发现这些草药和瓶子与酒中的有毒物质有关。
就在他们准备离开破庙时，突然从庙后冲出一群黑衣人，手持利刃，向他们扑来。狄仁杰等人毫不畏惧，与黑衣人展开了一场激烈的搏斗。经过一番苦战，他们终于击退了黑衣人。
从黑衣人的身上，狄仁杰发现了一块令牌，令牌上刻着一个神秘的符号。狄仁杰决定从这块令牌入手，继续调查。
经过多方打听，狄仁杰得知这个符号是一个神秘组织的标志。这个组织专门研究毒术，妄图用毒药控制朝廷，谋取私利。狄仁杰意识到，这起毒酒连环案背后隐藏着一个巨大的阴谋。
为了彻底捣毁这个神秘组织，狄仁杰决定深入虎穴。他化装成一个江湖游医，混入了神秘组织的一个据点。在据点里，他发现组织正在大量生产一种新型毒药，准备投放到长安城的水源中。
狄仁杰暗中记下了据点的位置和人员分布情况，然后找机会逃了出来。回到府衙后，他立刻制定了详细的抓捕计划。
在一个深夜，狄仁杰带领大批衙役和军队，包围了神秘组织的据点。经过一场激烈的战斗，他们终于将神秘组织的成员一网打尽，缴获了大量的毒药和制毒工具。
在审讯中，神秘组织的头目交代了罪行。原来，他们为了达到控制朝廷的目的，先是用毒酒制造恐慌，然后准备在水源中投毒，让整个长安城陷入混乱。
至此，毒酒连环案真相大白。狄仁杰成功破获了这起惊天大案，拯救了长安城的百姓。武则天对他大加赞赏，赐予他丰厚的奖赏。而狄仁杰深知，在这看似平静的大唐盛世下，仍有无数阴谋和罪恶在暗中滋生，他将继续肩负起维护正义的重任。
